potatoКартофелеводствоPotato Growing0134-9740Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по картофелеводству и плодоовощеводствуpotato-165Research ArticleИММУНИТЕТ И ЗАЩИТА КАРТОФЕЛЯPOTATO IMMUNITY AND PROTECTIONРАЗРАБОТКА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧЕРНОЙ НОЖКИ КАРТОФЕЛЯ (PECTOBACTERIUM ATROSEPTICUM)DEVELOPMENT OFIMMUNOFERMENTALDIAGNOSTIC TEST SYSTEMS FOR IDENTIFICATION OFPOTATOES BLACK LEG AGENT (PECTOBACTERIUM ATROSEPTICUM)ВарицевЮ. А.VaritsevYu. A.

пос. Красково, Люберецкий район, Московская область

varyuriy@yandex.ruСафенковаИ. В.SafenkovaI. V.ЗайцевИ. А.ZaytsevI. A.

пос. Красково, Люберецкий район, Московская область

ВарицеваГ. П.VaritsevaG. P.

пос. Красково, Люберецкий район, Московская область

ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства имени А.Г. Лорха»Russian FederationИнститут биохимии имени А.Н. Баха, ФИЦ «Фундаментальные основы биотехнологии» РАНRussian Federation201626042022241139148Copyright © Варицев Ю.А., Сафенкова И.В., Зайцев И.А., Варицева Г.П., 20222022Варицев Ю.А., Сафенкова И.В., Зайцев И.А., Варицева Г.П.Varitsev Y.A., Safenkova I.V., Zaytsev I.A., Varitseva G.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://potato.belal.by/jour/article/view/165

Получены специфические антисыворотки к четырем штаммам возбудителя черной ножки картофеля, относящихся к виду Pectobacterium atrosepticum – Pa393, Pa18077, Pa204-3 и Pa201-4. Показаны высокая иммунологическая активность и специфичность к Pectobacterium atrosepticum для антисывороток, полученных на основе штаммов Pa393 и Pa18077. На основе этих антисывороток приготовлены специфические части иммуноферментных диагностических тест-систем, позволяющие определять целевые бактерии с чувствительностью порядка 2·104–105 кл/мл и не реагирующие с близкородственными бактериями родов Pectobacterium и Dickeya, а также с другими фитопатогенными бактериями. Показан высокий уровень совпадения результатов при сравнительном испытании разработанных иммуноферментных диагностических тест-систем как с результатами полимеразной цепной реакции на основе праймеров Еca 1f/2r, так и коммерческим аналогом фирмы Loewe Biochemica (Германия).

Highly specific antiserums to four black leg strains of Pectobacterium atrosepticum Pa393, Pa18077, Pa204-3 and Pa201-4 were obtained. High immunological activity and specificity to Pectobacterium atrosepticum for the antiserums received on the basis of strains of Pa393 and Pa18077 are shown. Based on the antiserums the specific compounds of the ELISA test systems were developed with detection limits of 2·104–105 cells/ml and without crossreactivities to closely related and other pathogenic bacterias. Comparative testing for P. atrosepticum infection of the potatoes seeds showed high level of agreement of the developed ELISA results with the results of PCR based on primers Eca 1f/2r and commercial diagnostic ELISA kits Loewe Biochemica (Germany).

картофельсеменоводство картофелячерная ножка картофеляPectobacterium atrosepticumантисывороткаантителоиммунизацияиммуноферментный анализРоссияpotatoespotatoes seed productionpotatoes black legPectobacterium atrosepticumantiserumantibodyimmunizationenzyme linked immunosorbent assayRussiaReferencesМетодические указания по диагностике возбудителей черной ножки (Erwinia carotovora (Jones) Bergey et al.) и кольцевой гнили картофеля (Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Spieck. Et Kotth.) Skaptasson et Burk.) методами иммуноферментного анализа, иммунофлуоресцентной микроскопии и полимеразной цепной реакции / Ю.А. Варицев [и др.]. – М.: ВНИИ картофельного хозяйства, 2003. – 33 с.Методические указания по диагностике возбудителей черной ножки (Erwinia carotovora (Jones) Bergey et al.) и кольцевой гнили картофеля (Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Spieck. Et Kotth.) Skaptasson et Burk.) методами иммуноферментного анализа, иммунофлуоресцентной микроскопии и полимеразной цепной реакции / Ю.А. Варицев [и др.]. – М.: ВНИИ картофельного хозяйства, 2003. – 33 с.Киру, С.Д. Источники устойчивости к Erwinia carotovora (Van Hall) среди образцов культурных и диких видов картофеля из коллекции ВИР / С.Д. Киру, А.М. Лазарев // Фитосанитарное оздоровление экосистем: материалы второго Всероссийского съезда по защите растений, С.-Петербург, 5– 10 декабря 2005 г. / ВИЗР. – СПб., 2005. – Т. 1. – С. 466–468.Киру, С.Д. Источники устойчивости к Erwinia carotovora (Van Hall) среди образцов культурных и диких видов картофеля из коллекции ВИР / С.Д. Киру, А.М. Лазарев // Фитосанитарное оздоровление экосистем: материалы второго Всероссийского съезда по защите растений, С.-Петербург, 5– 10 декабря 2005 г. / ВИЗР. – СПб., 2005. – Т. 1. – С. 466–468.Лазарев, А.М. Биологические особенности возбудителя черной ножки картофеля в Северо-Западной зоне РСФСР и методы его диагностики: автореф. дис. … канд. биол. наук / А.М. Лазарев. – Л., 1985. – 18 с.Лазарев, А.М. Биологические особенности возбудителя черной ножки картофеля в Северо-Западной зоне РСФСР и методы его диагностики: автореф. дис. … канд. биол. наук / А.М. Лазарев. – Л., 1985. – 18 с.Третьякова, О.М. Пектолитическая и мацерирующая активность штаммов Pectobacterium carotovorum, Pectobacterium atrosepticum и Dickeya dadantii на тканях клубней картофеля / О.М. Третьякова, А.Н. Евтушенко // Картофелеводство. – Минск, 2010. – Т. 18. – С. 186–190.Третьякова, О.М. Пектолитическая и мацерирующая активность штаммов Pectobacterium carotovorum, Pectobacterium atrosepticum и Dickeya dadantii на тканях клубней картофеля / О.М. Третьякова, А.Н. Евтушенко // Картофелеводство. – Минск, 2010. – Т. 18. – С. 186–190.Allan, E. Immunofluorescent stain procedures for detection and identification of Erwinia carotovora var. atroseptica / E. Allan, A. Kelman // Phytopathology. – 1977. – Vol. 67. – P. 1305–1312.Allan, E. Immunofluorescent stain procedures for detection and identification of Erwinia carotovora var. atroseptica / E. Allan, A. Kelman // Phytopathology. – 1977. – Vol. 67. – P. 1305–1312.Barras, F. Extracellular enzymes and pathogenesis of soft rot Erwinia / F. Barras, F. Van Gijsegem, A.K. Chatterjee // Annual Review of Phytopathology. – 1994. – Vol. 32. – P. 201–34.Barras, F. Extracellular enzymes and pathogenesis of soft rot Erwinia / F. Barras, F. Van Gijsegem, A.K. Chatterjee // Annual Review of Phytopathology. – 1994. – Vol. 32. – P. 201–34.Charkowsky,A. The soft rot Erwinia /A. Charkowsky // In. Plant-Associated Bacteria. – 2006. – P. 423–505.Charkowsky,A. The soft rot Erwinia /A. Charkowsky // In. Plant-Associated Bacteria. – 2006. – P. 423–505.De Boer, S.H. PCR detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica associated with potato tissue / S.H. De Boer, L.J. Ward // Phytopathology. – 1995. – Vol. 85. – P. 854–858.De Boer, S.H. PCR detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica associated with potato tissue / S.H. De Boer, L.J. Ward // Phytopathology. – 1995. – Vol. 85. – P. 854–858.Dye, D.W. A taxonomic study of the genus Erwinia. II. The «carotovora» group / D.W. Dye // New Zealand Journal of Science. – 1969. – Vol. 12. – P. 81–97.Dye, D.W. A taxonomic study of the genus Erwinia. II. The «carotovora» group / D.W. Dye // New Zealand Journal of Science. – 1969. – Vol. 12. – P. 81–97.Phylogenetic position of phytopathogens within the Enterobacteriaceae / L. Hauben [et. al.] // Systematic and Applied Microbiology. – 1998. – Vol. 21. – P. 384–397.Phylogenetic position of phytopathogens within the Enterobacteriaceae / L. Hauben [et. al.] // Systematic and Applied Microbiology. – 1998. – Vol. 21. – P. 384–397.Hugh, R. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various Gram-negative bacteria / R. Hugh, E. Leifson // Journal of Bacteriology. – 1953. – Vol. 66. – P. 24–26.Hugh, R. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various Gram-negative bacteria / R. Hugh, E. Leifson // Journal of Bacteriology. – 1953. – Vol. 66. – P. 24–26.Perombelon, M.C.M. Potato blackleg: Epidemiology, host-pathogen interaction and control / M.C.M. Perombelon // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1992. – Vol. 98. – P. 135–46.Perombelon, M.C.M. Potato blackleg: Epidemiology, host-pathogen interaction and control / M.C.M. Perombelon // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1992. – Vol. 98. – P. 135–46.Van Vuurde, J.W.L. Comparison of immunofluorescence colony-staining in media, selective isolation on pectate medium, ELISA and immunofluorescence cell staining for detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica and E. chrysanthemi in cattle manure slurry / J.W.L. Van Vuurde, N.J.M. Roozen // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1990. – Vol. 96. – P. 75–89.Van Vuurde, J.W.L. Comparison of immunofluorescence colony-staining in media, selective isolation on pectate medium, ELISA and immunofluorescence cell staining for detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica and E. chrysanthemi in cattle manure slurry / J.W.L. Van Vuurde, N.J.M. Roozen // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1990. – Vol. 96. – P. 75–89.Genus Erwinia: numerical analysis of phenotypic features / L. Verdonck [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1987. – Vol. 37. – P. 4–18.Genus Erwinia: numerical analysis of phenotypic features / L. Verdonck [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1987. – Vol. 37. – P. 4–18.Waldee, E.L. Comparative studies of some peritrichous phytopathogenic bacteria / E.L.Waldee // Iowa State J. Sci. – 1945. – Vol. 19. – P. 435–484.Waldee, E.L. Comparative studies of some peritrichous phytopathogenic bacteria / E.L.Waldee // Iowa State J. Sci. – 1945. – Vol. 19. – P. 435–484.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.