DEVELOPMENT OFIMMUNOFERMENTALDIAGNOSTIC TEST SYSTEMS FOR IDENTIFICATION OFPOTATOES BLACK LEG AGENT (PECTOBACTERIUM ATROSEPTICUM)
Abstract
Highly specific antiserums to four black leg strains of Pectobacterium atrosepticum Pa393, Pa18077, Pa204-3 and Pa201-4 were obtained. High immunological activity and specificity to Pectobacterium atrosepticum for the antiserums received on the basis of strains of Pa393 and Pa18077 are shown. Based on the antiserums the specific compounds of the ELISA test systems were developed with detection limits of 2·104–105 cells/ml and without crossreactivities to closely related and other pathogenic bacterias. Comparative testing for P. atrosepticum infection of the potatoes seeds showed high level of agreement of the developed ELISA results with the results of PCR based on primers Eca 1f/2r and commercial diagnostic ELISA kits Loewe Biochemica (Germany).
About the Authors
Yu. A. Varitsev
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства имени А.Г. Лорха»
Russian Federation
Russian Federation
I. V. Safenkova
Институт биохимии имени А.Н. Баха, ФИЦ «Фундаментальные основы биотехнологии» РАН
Russian Federation
Russian Federation
I. A. Zaytsev
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства имени А.Г. Лорха»
Russian Federation
Russian Federation
G. P. Varitseva
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства имени А.Г. Лорха»
Russian Federation
Russian Federation
References
1. Методические указания по диагностике возбудителей черной ножки (Erwinia carotovora (Jones) Bergey et al.) и кольцевой гнили картофеля (Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Spieck. Et Kotth.) Skaptasson et Burk.) методами иммуноферментного анализа, иммунофлуоресцентной микроскопии и полимеразной цепной реакции / Ю.А. Варицев [и др.]. – М.: ВНИИ картофельного хозяйства, 2003. – 33 с.
2. Киру, С.Д. Источники устойчивости к Erwinia carotovora (Van Hall) среди образцов культурных и диких видов картофеля из коллекции ВИР / С.Д. Киру, А.М. Лазарев // Фитосанитарное оздоровление экосистем: материалы второго Всероссийского съезда по защите растений, С.-Петербург, 5– 10 декабря 2005 г. / ВИЗР. – СПб., 2005. – Т. 1. – С. 466–468.
3. Лазарев, А.М. Биологические особенности возбудителя черной ножки картофеля в Северо-Западной зоне РСФСР и методы его диагностики: автореф. дис. … канд. биол. наук / А.М. Лазарев. – Л., 1985. – 18 с.
4. Третьякова, О.М. Пектолитическая и мацерирующая активность штаммов Pectobacterium carotovorum, Pectobacterium atrosepticum и Dickeya dadantii на тканях клубней картофеля / О.М. Третьякова, А.Н. Евтушенко // Картофелеводство. – Минск, 2010. – Т. 18. – С. 186–190.
5. Allan, E. Immunofluorescent stain procedures for detection and identification of Erwinia carotovora var. atroseptica / E. Allan, A. Kelman // Phytopathology. – 1977. – Vol. 67. – P. 1305–1312.
6. Barras, F. Extracellular enzymes and pathogenesis of soft rot Erwinia / F. Barras, F. Van Gijsegem, A.K. Chatterjee // Annual Review of Phytopathology. – 1994. – Vol. 32. – P. 201–34.
7. Charkowsky,A. The soft rot Erwinia /A. Charkowsky // In. Plant-Associated Bacteria. – 2006. – P. 423–505.
8. De Boer, S.H. PCR detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica associated with potato tissue / S.H. De Boer, L.J. Ward // Phytopathology. – 1995. – Vol. 85. – P. 854–858.
9. Dye, D.W. A taxonomic study of the genus Erwinia. II. The «carotovora» group / D.W. Dye // New Zealand Journal of Science. – 1969. – Vol. 12. – P. 81–97.
10. Phylogenetic position of phytopathogens within the Enterobacteriaceae / L. Hauben [et. al.] // Systematic and Applied Microbiology. – 1998. – Vol. 21. – P. 384–397.
11. Hugh, R. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various Gram-negative bacteria / R. Hugh, E. Leifson // Journal of Bacteriology. – 1953. – Vol. 66. – P. 24–26.
12. Perombelon, M.C.M. Potato blackleg: Epidemiology, host-pathogen interaction and control / M.C.M. Perombelon // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1992. – Vol. 98. – P. 135–46.
13. Van Vuurde, J.W.L. Comparison of immunofluorescence colony-staining in media, selective isolation on pectate medium, ELISA and immunofluorescence cell staining for detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica and E. chrysanthemi in cattle manure slurry / J.W.L. Van Vuurde, N.J.M. Roozen // Netherlands Journal of Plant Pathology. – 1990. – Vol. 96. – P. 75–89.
14. Genus Erwinia: numerical analysis of phenotypic features / L. Verdonck [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1987. – Vol. 37. – P. 4–18.
15. Waldee, E.L. Comparative studies of some peritrichous phytopathogenic bacteria / E.L.Waldee // Iowa State J. Sci. – 1945. – Vol. 19. – P. 435–484.
Review
For citations:
Varitsev Yu.A., Safenkova I.V., Zaytsev I.A., Varitseva G.P. DEVELOPMENT OFIMMUNOFERMENTALDIAGNOSTIC TEST SYSTEMS FOR IDENTIFICATION OFPOTATOES BLACK LEG AGENT (PECTOBACTERIUM ATROSEPTICUM). Potato Growing. 2016;24(1):139-148. (In Russ.)
Views: 157
Email this article 